我们先来简单了解一下荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的工作原理。
荧光显微镜:荧光显微镜是以紫外线为光源,样品自身发光或者经过荧光染料或荧光抗体染色处理之后,照射被检物体,受紫外激发产生荧光,探测器检测,在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。
激光共聚焦显微镜:全称是激光扫描共聚焦荧光显微镜,是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据,以激光作为光源,逐点激发样品内荧光,采用精密针孔滤波技术,有效抑制了非聚焦平面的杂散光,具有层析成像能力和很高的成像信噪比。在荧光显微镜的基础上添加了激光扫描装置,激光从发射器发出,在照明针孔分成三束,经过分光镜反射,在物镜处折射,聚焦于样品的焦平面上,如果样品中有被激光激发的荧光基团,就会产生荧光,按照激光进入的光路原路返回,返回的荧光在成像系统(一种可以把光信号转化为电信号传感器)中再次聚焦成相。因为在两个位置(样品和成像系统)聚焦,所以叫做共聚焦。
荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的区别。
荧光显微镜又叫宽场荧光显微镜,当成像面较厚,焦面上方下方的干扰信号都会被观察到,影响实验结果,因此荧光显微镜只能观察静态的亚细胞结构。
激光共聚焦显微镜是在传统荧光显微镜成像的基础上,附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置,通过计算机控制来进行数字化图像采集和处理的系统。可以观察亚细胞层次的一些生化变化,是目前先进的分子细胞生物学的分析仪器。
激光共聚焦显微镜比普通荧光显微镜获得更高对比度、高分辨率图像,同时具有高灵敏度,对检测样品无损伤、可靠和优良重复性。激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时可观察并可形成清晰的三维图像等优点,能比宽场看到的成像面更薄,更清晰,在较以往更短的采集时间内轻松实现超高分辨率更大观察视野成像。