透射式荧光显微镜:
透射式荧光显微镜由汞灯发出的各种谱线的光线,经激发滤光片后只让某一种波长的紫外光线通过,如波长为404.7nm蓝紫光,经反光镜后,激发样品产生荧光。这个滤光片将其它波长的光线滤掉,并使样品激发荧光,所以称激发滤光片。
通常,荧光波长比激发样品的光的波长大得多,是可见光。这样产生的荧光和透过样品的一部分激发光(紫外光),经物镜成像后,人眼即可用目镜观察荧光图像。为了防止紫外光进人目镜视场,降低图像材度和损伤人眼,安放了一块截止滤光片,它只让某一部分波长的谱线通过,如只让500~750nm的可见光通过,而不让500nm以下的光通过,所以称为截止滤光片。
反射式荧光显微镜:
反射式荧光显微镜和透射式荧光显微镜的原理类同。
反射式荧光显微镜有下列优点:
①光能的利用率高。在反射式荧光显微镜中,激发光直接照射在标本的观察表面;而在透射式荧光显微镜中,激发光穿过具有一定厚度的标本后才抵达观察表面,能量被衰减。
②反射式荧光显微镜可以观察不透明标本。所以现在大多采用反射式荧光显微镜。然而,实现反射荧光的技术难度较高,此技术随着电子计算机的出现,薄膜技术的不断发展才得以实现。实际反射式荧光显微镜中,激发、截止滤光片和半透分光镜是做成一个滤光片组。