为什么荧光显微镜需要校正呢？

我们先要知道荧光显微镜的构造即主要包括哪些核心“配件”。

荧光显微镜主要包含或者说可以简化为荧光光源（激光、LED、汞灯、白激光超连续谱光源等）、荧光滤色块（不同Chanel通道）、荧光成像所需的相机、以及显微镜主体（物镜）几个部分。

具体过程为，当单色或宽光谱的光（白激光、LED、汞灯等）经过前方的filter选出不同的通道，再经过二向分色镜（短波长反射，长波长通过）到物镜*后到达样品，由于荧光样品都是常见的下转换的荧光材料如DAPI、GFP、RFP等，即短波长激发长波长。后面激发出的荧光再次经过二向色镜（短反长通）以及另一片filter（将杂光滤掉）到达成像系统即相机或眼睛。

然后，了解了荧光显微镜的光路的特点的基础，我们就可以分析为什么荧光显微镜需要校正。

荧光成像是一个复杂的系统，除了需要以上一些核心配件的联动和配合外，为了拍出更好的效果，光路中不可避免的要加入不同的透镜、针孔等等，甚至是不同物镜的取舍。但是这些不同配件件的联动随着时间的拉长不可能总是那么好，光源的功率、物镜完好程度、或者光路中元器件位置的轻微改变，抑或载物台的略微不平都会*终反应到成像效果上，所以理论上应该定期评估显微镜的成像质量进行校正，尤其是对强度有要求的实验更该如此。

而且据我了解，当下国内的一些平台也在做类似的工作，不过大家用的*普遍的是荧光beads（荧光微球）来进行测试评估。